F.1 回、排風(fēng)高效過濾風(fēng)口微生物透過率

　　F.1.1 儀器設(shè)備和材料應(yīng)符合以下要求：

　　1 儀器設(shè)備：

　　Φ90玻璃平皿(或塑料平皿);

　　空氣微生物采樣器(固體撞擊式采樣器、離心式采樣器、液體沖擊式采樣器等均可使用，常用的為安德遜(Andersen)采樣器，隸屬于固體撞擊式采樣器);

　　微生物氣溶膠發(fā)生器(由氣泵、油水分離器、流量計、高效過濾器、噴霧器、緩沖瓶等組成);

　　各種玻璃移液管、吸管、試管、容器瓶等;

　　計時器(如秒表);

　　恒溫培養(yǎng)箱;

　　潔凈工作臺;

　　高壓蒸汽消毒鍋。

　　2 材料：

　　胰蛋白酶大豆瓊脂培養(yǎng)基;

　　生理鹽水;

　　75%酒精;

　　菌種(宜選用毒性小或沒有毒性，且便于區(qū)別大氣雜菌的特定菌種，常用的有枯草芽孢桿菌、黏質(zhì)沙雷氏菌、大腸噬菌體等);

　　采樣介質(zhì)可選用硅酮類、石油胨類、醇類、糖類、纖維素類、蛋白類、混合類、組織培養(yǎng)液等;

　　套筒(測定回、排風(fēng)高效過濾風(fēng)口時需要使用，罩住整個入口，使檢漏范圍包括邊框，長度應(yīng)使通過氣流時間為0.5s～1s，見圖F.1.1)。

　　F.1.2 透過率應(yīng)按以下方法評價：

　　在回、排風(fēng)高效過濾風(fēng)口進風(fēng)端加設(shè)套筒，在套筒口部發(fā)生微生物氣溶膠，在過濾器出風(fēng)面用浮游菌法采樣，由回、排風(fēng)高效過濾風(fēng)口前后的微生物氣溶膠濃度可計算得出微生物透過率。

　　F.1.3 檢測步驟應(yīng)符合下列要求：

　　1 制定方案：明確評價任務(wù)，制定詳細的評價方案，包括確定微生物氣溶膠、發(fā)生器所需的菌液濃度、潔凈壓縮空氣流量，確定在回、排風(fēng)高效過濾風(fēng)口出風(fēng)端的微生物采樣周期、采樣次數(shù)等，一般可根據(jù)回、排風(fēng)高效過濾風(fēng)口的塵埃顆粒物過濾效率進行計算。

　　2 實驗準備：根據(jù)預(yù)先制定的評價方案，準備所需材料、儀器設(shè)備，制作采樣培養(yǎng)皿，一般而言，采樣細菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，采集真菌用沙氏或真菌選擇培養(yǎng)基，采樣病毒用根據(jù)病毒特性配制的采樣介質(zhì)。

　　3 發(fā)生微生物氣溶膠：將培育好的高濃度微生物溶液，一般為(108～1010)cfu/mL，利用生理鹽水按10倍稀釋法逐次稀釋至需要的低濃度(步驟1確定的濃度)，然后由移液管、吸管量取一定容積的低濃度微生物溶液至氣溶膠發(fā)生裝置的溶液瓶，由微生物氣溶膠發(fā)生器在回、排風(fēng)高效過濾風(fēng)口的進風(fēng)端將微生物溶液霧化發(fā)生微生物氣溶膠。

　　4 采樣：對于回、排風(fēng)高效過濾風(fēng)口，可在其后的出風(fēng)管道中采樣，離排風(fēng)高效過濾風(fēng)門的距離根據(jù)實際工程而定，原則上出風(fēng)后有所混合，能近則好，采樣點沿風(fēng)管寬度方向均勻布置3點。采樣周期、采樣次數(shù)按預(yù)先制定的評價方案執(zhí)行。采樣過程中，不能中斷微生物氣溶膠的發(fā)生，采樣結(jié)束后才能停止發(fā)生微生物氣溶膠，此后噴霧器中必須尚存不少于一半的微生物溶液，且需對剩余菌液活性進行涂布法驗證，以修正菌液濃度。

　　5 培養(yǎng)：將采好的平皿立即蓋上蓋，細菌類在(35～37)℃培養(yǎng)(1～2)d，結(jié)核菌培養(yǎng)3周，真菌在28℃培養(yǎng)3d。上述培養(yǎng)時間可根據(jù)所采樣微生物特性而適當(dāng)調(diào)整，培養(yǎng)的過程中應(yīng)定期觀察培養(yǎng)箱內(nèi)菌落的生長情況，避免培養(yǎng)箱內(nèi)干燥菌落不生長或培養(yǎng)皿內(nèi)菌落過多充分生長匯合等情況的發(fā)生。

　　6 計數(shù)：可以目測、電子顯微鏡、菌落計數(shù)器等對采集到且培養(yǎng)好的菌落進行計數(shù)，當(dāng)采到的菌落很多時，在它們未生長匯合前，用顯微鏡及早觀察，將平皿劃成許多相等的部分抽出一部分數(shù)菌，然后乘以所劃份數(shù)，即可得出每皿總菌數(shù)。計數(shù)完畢后，可根據(jù)式(F.1.3—1)計算濃度：

　　8 消毒滅菌：實驗結(jié)束后，需對剩余菌液以及所用各種儀器、設(shè)備、平皿等進行消毒滅菌、酒精擦洗處理。

　　F.1.4 在進行潔凈室生物學(xué)評價時應(yīng)符合以下要求：

　　1 正式試驗前，應(yīng)進行預(yù)備試驗，并對各種儀器進行調(diào)試和標(biāo)定。

　　2 應(yīng)進行陽性對照試驗。

　　3 應(yīng)進行陰性對照試驗。

　　4 應(yīng)在陽性試驗中長菌，陰性試驗組不長菌。

　　5 實驗過程中應(yīng)注意實驗人員的安全防護，實驗結(jié)束后應(yīng)做好各種儀器、設(shè)備、衣物等的消毒滅菌處理。

　　6 試驗結(jié)束后，需對微生物氣溶膠發(fā)生器內(nèi)的剩余菌液活性進行涂布法驗證，修正式(F.1.3—3)中的菌液濃度。

　　7 采樣周期應(yīng)設(shè)計合理，當(dāng)確定采樣周期存在一定困難時，宜增加采樣次數(shù)，每次采樣使用不同的采樣周期。

　　F.2 對微生物氣溶膠局部泄漏擴散的抑制能力評價

　　F.2.1 儀器設(shè)備和材料應(yīng)符合下列要求：除不需要套筒，但需要Φ90培養(yǎng)皿分層布置框架(圖F.2.1所示)外，其他設(shè)備和材料與第F.1.1條相同。

　　F.2.2 漏泄擴散抑制能力可按以下方法評價：在潔凈室內(nèi)的要求地點(可任意選定或選擇有代表性的地點)，用微生物氣溶膠發(fā)生器人工發(fā)菌，進行潔凈室對微生物氣溶膠局部泄漏擴散的兩類抑制能力的評價：

　　1 抑制微生物污染擴散有效高度及有效區(qū)域的評價：利用沉降菌法，將Φ90培養(yǎng)皿按不同垂直高度在室內(nèi)分層均勻布置(如分3層0.8m、1.2m、1.5m，每層對角線5點布置)。

　　2 自凈時間的評價：利用浮游菌法進行評價，每隔一段時間用空氣微生物采樣器進行采樣，采樣地點宜選擇有代表性的固定區(qū)域(如在1.5m左右的呼吸帶區(qū)域)，觀察潔凈室內(nèi)微生物污染濃度隨時間的變化規(guī)律，從而對潔凈室抑制微生物氣溶膠局部泄漏擴散的能力作出評價。

　　F.2.3 泄漏擴散抑制能力可按以下步驟評價：

　　1 制定方案：明確評價任務(wù)，制定詳細的評價方案，包括確定微生物氣溶膠發(fā)生器所需的菌液濃度、潔凈壓縮空氣流量、氣溶膠發(fā)生時間周期(即確定模擬的微生物氣溶膠泄漏擴散是瞬時發(fā)生還是持續(xù)發(fā)生，發(fā)生周期為多長)，確定采樣地點、采樣時間間隔、每次采樣的采樣周期、采樣次數(shù)等。

　　2 實驗準備應(yīng)符合第F.1.3條的要求。

　　3 發(fā)生微生物氣溶膠：將培育好的高濃度微生物溶液，利用生理鹽水按10倍稀釋法逐次稀釋至需要的低濃度，然后由吸管量取一定容積的低濃度微生物溶液至氣溶膠發(fā)生裝置的溶液瓶，由微生物氣溶膠發(fā)生器在潔凈室內(nèi)的要求地點將微生物溶液霧化發(fā)生微生物氣溶膠。氣溶膠發(fā)生時間周期按預(yù)先制定的評價方案執(zhí)行。

　　4 采樣：在潔凈室內(nèi)的要求地點用空氣微生物采樣器進行浮游菌法采樣或用Φ90培養(yǎng)皿進行沉降菌法采樣，采樣地點、采樣時間間隔、采樣周期、采樣次數(shù)按預(yù)先制定的評價方案執(zhí)行。

　　5 培養(yǎng)應(yīng)符合第F.1.3條的要求。

　　6 計數(shù)應(yīng)符合第F.1.3條的要求。

　　7 對微生物氣溶膠局部泄漏擴散的抑制能力評價：

　　1)沉降菌法：由步驟6得出的每層高度下的每個采樣點的室內(nèi)微生物氣溶膠濃度可對抑制微生物污染擴散有效高度及有效區(qū)域作出評價;

　　2)浮游菌法;由步驟6得出的每個采樣時刻的潔凈室內(nèi)微生物氣溶膠濃度可作出一條曲線，直觀地反映出潔凈室內(nèi)微生物氣溶膠濃度隨時間的變化規(guī)律，求出自凈時間。

　　8 消毒滅菌應(yīng)符合第F.1.3條的要求。

　　F.2.4 評價應(yīng)符合第F.1.4條的要求。

　　F.3 生物安全柜的隔離系數(shù)

　　F.3.1 儀器設(shè)備和材料除不需要套筒外，應(yīng)符合第F.1.2條的規(guī)定。另按現(xiàn)行行業(yè)標(biāo)準《生物安全柜》JG 170需1根聲Φ70、長為安全柜凈深加150mm的塑料圓筒。

　　F.3.2 檢測隔離系數(shù)應(yīng)按現(xiàn)行行業(yè)標(biāo)準《生物安全柜》JG 170第6.3.4條的方法檢驗。

　　F.3.3 安全柜隔離系數(shù)λ按下式評價：